全球有超过1.7亿人感染丙型肝炎病毒(HCV),这种病毒的破坏性影响由于在感染期间HCV持续存在的高频率而进一步扩大,从而导致高达85%的病例。HCV感染已成为西方成人肝细胞癌最常见的病因和肝移植的主要原因。埃及是丙型肝炎病毒感染人数最多(12%)的国家,因此有很大一部分人口面临感染风险。骆驼乳是一种重要的营养来源,感染丙型肝炎病毒的埃及患者会大量食用骆驼乳作为替代和/或支持药物。为了探索骆驼乳中可能具有保护作用的大分子,研究者们先前筛选并分析了2种骆驼乳蛋白:乳铁蛋白和淀粉酶的抗HCV活性。乳铁蛋白对HCV细胞进入初代白细胞和HepG2细胞均具有明显的抑制作用,而淀粉酶在同一组织培养体系中不能发挥抗病毒作用。但这些研究没有发现骆驼乳乳铁蛋白或淀粉酶对初生白细胞或HepG2细胞有任何细胞毒性作用。乳铁蛋白和淀粉酶都是骆驼乳中的次要蛋白质,而骆驼酪蛋白占蛋白质总量的80%(v/v),可以通过降低pH值从脱脂乳中简单地分离出来。因此,本研究旨在探讨纯化骆驼乳酪蛋白对初代白细胞和HepG2细胞的抗HCV潜在活性。

图1 骆驼酪蛋白抗丙型肝炎病毒活性
研究发现不含α-乳清蛋白的骆驼酪蛋白不能阻断HCV细胞的进入。PBMCs(外周血单核细胞)(2.5×105)或HepG2细胞被重复培养,其中一种培养物用2.0 mg/mL酪蛋白处理60 min,然后感染HCV 90 min。另一组接种HCV感染血清,用酪蛋白预处理(2.0 mg/mL) 60 min,接种细胞培养8d。在这些细胞中,逆转录套式聚合酶链反应扩增了HCV非编码序列5′端的174bp区域,与阳性对照(HCV感染细胞)和阴性对照(未感染细胞)相比。在HepG2细胞中未检测到174 bp条带,而在PBMCs中检测到174 bp条带。如图1所示,第1条是DNA阶梯,第2条和第5条是HepG2细胞的阴性对照样本,第3条和第6条是HepG2细胞的阳性对照样本。在浓度为2.0 mg/mL的情况下,检测酪蛋白(含α-乳清蛋白和不含α-乳清蛋白)是否能阻止HCV进入HepG2细胞(分别为4和7通道)。8号和9号通道分别是PBMCs的阴性和阳性对照样品,检测浓度为2.0 mg/mL的酪蛋白阻断HCV进入PBMCs的能力(10号通道)。扩增产物经3%琼脂糖凝胶溶解,溴化乙锭染色。上述结果表明,纯化的骆驼酪蛋白中的α-乳清蛋白可能是目前HepG2和HeLa细胞凋亡诱导的因素。骆驼酪蛋白不能通过直接或间接的相互作用阻止或中和HCV细胞的进入。